細胞計數(shù)是細胞培養(yǎng)過程中的重要步驟,為了解細胞的濃度、數(shù)量和活率等信息,實驗人員常用臺盼藍染料或AOPI熒光染料對細胞進行染色-計數(shù)。
1、臺盼藍染色法
臺盼藍染色是細胞計數(shù)中常用的活/死細胞鑒定染色方法之一。
原理:正常的活細胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺盼藍,細胞不被染色;而死細胞的胞膜不完整,通透性增加,既死細胞會被染成藍色,利用臺盼藍染料的特性便可區(qū)分活/死細胞。
缺點:
1-臺盼藍對細胞有毒害作用,會致死有損傷的細胞,導(dǎo)致細胞活性檢測結(jié)果有所偏差;
2-細胞碎片多、雜質(zhì)多等情況下,無法進行準(zhǔn)確計數(shù)。
適用細胞種類:培養(yǎng)系細胞。
2、AOPI染色法
當(dāng)細胞樣品中的雜質(zhì)過多,明場下無法進行準(zhǔn)確計數(shù)時,我們可以在熒光通道下,用AOPI熒光染料對細胞進行染色。
原理:AOPI熒光染料因其只與DNA和RNA結(jié)合的特性——既活細胞呈現(xiàn)綠色,死細胞呈現(xiàn)紅色,利用AOPI染色法,可排除雜質(zhì)對目標(biāo)細胞的干擾,快速區(qū)分活/死細胞。
優(yōu)點:可排除紅細胞、血小板、細胞碎片等雜質(zhì)對目標(biāo)細胞的干擾。
缺點:與臺盼藍試劑相比,成本較高。
適用細胞種類:免疫細胞、原代細胞、血液細胞等。
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