細胞計數(shù)片是一種常用的細胞計數(shù)工具,醫(yī)學上常用來計數(shù)紅細胞、白細胞等而得名,也常用于計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量,是一種常見的生物學工具。
細胞計數(shù)片的使用說明:
(1)充分混勻細胞,將細胞懸液滴加在兩個細胞入口處。
(2)放在顯微鏡下靜置1-2分鐘等待細胞附著在計數(shù)板上。
(3)按照A→B→C→D的順序?qū)γ總€細胞計數(shù)室的細胞進行計數(shù)后加和。
(關(guān)于網(wǎng)格線上的計數(shù)規(guī)則清參照下圖以及注釋(2))
(3)細胞密度(CellDensity)通過以下公式計算得到,N是四個細胞計數(shù)室的
(4)細胞總數(shù).
CellDensity=(N/4)x104cells/mL
(*)對于計數(shù)前經(jīng)過稀釋的細胞懸液,要將上式計算所得的細胞密度乘以稀釋倍數(shù)。
注意:
(1)為了將誤差最小化,四個計數(shù)室中的細胞均應(yīng)被計數(shù).只計數(shù)一個細胞室會增加誤差的機會,要取得更加正確的數(shù)值可以將細胞加在兩個細胞入口,并取兩個N值的平均值。
(2)(邊界線細胞計數(shù)規(guī)則)細胞計數(shù)室上的方格邊線上,細網(wǎng)格線上的細胞應(yīng)該計數(shù),粗網(wǎng)格線上的細胞則不要計入,例如細胞計數(shù)室A。
(3)為了提高計算細胞存活率,操作者應(yīng)該在染色后20分鐘內(nèi)完成計數(shù)(對于對染色液敏感的細胞應(yīng)在5分鐘內(nèi)完成)。細胞在染色液中時間過長會增加死細胞的數(shù)量。
(4)氣泡在細胞計數(shù)室中偶爾會出現(xiàn),如果加樣后細胞在計數(shù)室中停留時間過長,就有可能出現(xiàn)氣泡干擾計數(shù)結(jié)果。
(5)細胞計數(shù)室具有經(jīng)過預處理的表面,操作者不能重復使用計數(shù)板,因為在一次使用后計數(shù)室表面特性改變,重復用后會帶來不正確的計數(shù)結(jié)果。
(6)為了儲存沒有用過的計數(shù)板,操作者應(yīng)將其放入密封的保險袋中,不要將用過的塑料板裝進原來的塑料袋中。
(7)在室溫下保存,高溫會改變計數(shù)室表面的特性。
(8)實驗室專用,非臨床,治療,診斷用途。